西安百萤生物科技有限公司 主营:百萤生物围绕荧光发光、荧光标记、荧光探针等技术进行产品研发,公司产品广泛用于核酸蛋白定量、细胞凋亡研究、细胞信号通路研究、细胞及线粒体膜电位检测、细胞器染色、活体示踪、抗体标记等科研领域。
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钙黄绿素_Calcein,AM常见问题—百萤生物帮您答疑解惑

1.钙黄绿素产品的用途是什么?

答:钙黄绿素是用来标记和监测活细胞的细胞功能的一类荧光探针/试 剂盒。它只针对活细胞进行染色,不能染已固定的细胞。
注:染色时间不可太久,保持在**内,**后,荧光会变得不明显。



2.钙黄绿素中带 AM 与不带 AM 的探针有什么区别?它们的优点是什么?

答:不带 AM 的探针可以直接注射进入细胞,而带 AM 的探针,因为 AM 具有细胞膜渗透性,一旦进入细胞,被细胞内酯酶水解为钙黄绿素 (Calcein),产生强烈的绿色荧光(Ex/Em= 490nm/515nm)。因不具细胞膜渗透性,从而能被保留在细胞内。Calcein Red 和 Calcein Deep Red 两种类似物,使其能够替代 Calcein AM 用在活细胞的标记和功能分析的多重标记研究。AM 酯是非极性酯,其易于穿过活细胞膜, 并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM 酯广泛用于非侵入性地将 各种极性荧光探针加载到活细胞中。但是,使用 AM 酯时必须小心,因为它们易于水解,特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质 量的无水二甲基亚砜(DMSO)。DMSO 储备溶液可以在-20℃下干燥储存 并避光。在这些条件下,AM 酯可以稳定数个月。



3.钙黄绿素的染色过程需要注意哪些问题?

答:细胞离心,去培养基,清洗细胞 1~2 次,以充分去除残留的培养基,稀释成工作浓度为 2-5μM (PBS 或 HBSS-HEPES)有时可添加一定量的非离子表面活性剂如 Pluronic F127 到 Calcein Red ™储存液 内来增强其水溶性 37℃ 孵育 20min~1h 用 PBS(或者其他缓冲液)洗 涤细胞两次去除多余染料
注:1.细胞活力理想的浓度范围应在 4-5μM
  2.如果细胞中含有有机阴离子转运蛋白,可以在细胞培养基中加 入丙磺舒(1-2.5 mM)或磺吡酮(0.1-0.25 mM),以减少脱酯化。
  3.因为背景高的原因,需要多清洗细胞几次去除多余染料。



4.钙黄绿素适用于哪些仪器?

答:荧光显微镜、流式细胞仪
注:使用流式细胞仪时需要立即分析细胞样品,以确定在零时间没有 洗涤的每个细胞的平均荧光。



5.钙黄绿素与其他活细胞染料相比有何优势?

答:钙黄绿素与其他同类产品(如 CFDA、CFSE 等)相比是特别适合染 活细胞的荧光探针,因为它的毒性特别低。并且它不会抑制细胞的各 种功能,如增殖、趋化性等。
注:钙黄绿素和碘化丙啶(PI)常用于鉴别死活细胞。钙黄绿素的亲脂性很高,可以通过细胞膜,脱去AM后发生强烈绿色荧光;而碘化丙 啶(PI)不能通过活细胞的细胞膜,它仅可以穿过死细胞膜,嵌入其 DNA 螺旋产生红色荧光。由于钙黄绿素与碘化丙啶在 490nm 处均可被激发,545nm 激发仅可观察死细胞。因此,他们被用于活细胞和死细胞双重染色。



6、钙黄绿素在作为显色剂时如何很好的溶解?

答:钙黄绿素在在 1mol/L 的氢.氧.化.钠溶液中,溶解度能达到 50mg,并且超声助溶不会破坏其结构。
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