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1.根据您的特定方案，将细胞培养至*佳密度以诱导细胞凋亡
对于在96孔微孔板培养物中生长的贴壁细胞，我们推荐约30,000至50,000个细胞/孔，对于非贴壁细胞，推荐约1至2×106个细胞/ mL。 同时，对每种标记，都需要使用阴性对照。 以下是一些诱导悬浮培养细胞凋亡的例子：
1）用2μg/ ml喜树碱处理Jurkat细胞3小时。
2）用1μM星形孢菌素处理Jurkat细胞3小时。
3）用4μg/ ml喜树碱处理HL-60细胞4小时。
4）用1μM星形孢菌素处理HL-60细胞4小时。
2.固定和染色
2.1移除细胞培养基。
2.2向每个孔中加入100μL/孔/ 96孔板的4％甲醛固定缓冲液（未提供）。
注意：对于非贴壁细胞，添加所需量（如2 x 106个细胞/ mL）的4％甲醛固定缓冲液。
2.3在室温下孵育板20至30分钟。
2.4去除固定剂。
可选：如果需要，在固定后加入100μL/孔/ 96孔板的透化试剂（0.2％Triton X-100，在PBS中，未提供），并在室温下孵育平板10分钟。
2.5用PBS洗涤细胞2-3次。
可选：您也可以使用DNAase I通过在室温下用DNA酶I消化细胞30分钟来制备TUNEL反应的阳性对照，然后进行TUNEL反应（步骤3）
3.TUNEL反应
3.1根据待测样品的数量，在使用前准备反应混合物（见说明书）
3.2将50μL反应混合物（来自步骤3.1）加入每个孔或管中，并在37℃下孵育60分钟。
3.3取出反应混合物，用200μL/孔的PBS洗涤细胞3-5次。
4.通过荧光显微镜，流式细胞仪或荧光酶标仪在Ex / Em = 550 / 590nm处监测荧光强度。
5.可选：用1X Hoechst（组分C，Ex / Em = 350 / 460nm）染色细胞核用于图像分析。
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