西安百萤生物科技有限公司 主营:百萤生物围绕荧光发光、荧光标记、荧光探针等技术进行产品研发,公司产品广泛用于核酸蛋白定量、细胞凋亡研究、细胞信号通路研究、细胞及线粒体膜电位检测、细胞器染色、活体示踪、抗体标记等科研领域。
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细胞膜荧光探针DIR化学

 细胞膜荧光探针DIR化学性质
  荧光定量PCR(细胞膜荧光探针DIR)所使用的荧光化学制剂可分为两种:荧光探针和荧光染料。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
  实时荧光PCR(细胞膜荧光探针DIR)技术靶基因的确定及引物和探针的设计原则
  1.靶基因的确定:选择检测组共有的基因以避**测的假阴性(漏检)。
  2.检测片段的确定:选择检测组内的保守 (突变少)(避免假阴性)、组间特异的序列 (突变多)(避免假阳性)作为引物探针的设计位置。片段长度70-150bp。
  3.引物:长度17-25bp;GC含量30-80%;退火温度(Tm值)58-60℃;避免稳定的引物二聚体(特别是多联检测)及发夹结构(自由能大于-3.5kc/m);序列不能出现连续的G,3’端避免G或C,*后5个碱基内避免两个以上的G或C。
  4.探针:长度20-30bp(Taqman)或16-25bp(MGB);GC含量30-80%;Tm值为68-70℃;避免稳定的二聚体及发夹结构 (自由能大于-3.5kc/m);5’端不能是G;位置尽量靠近上游引物;选择波长差异较大(多联检测)或Fam(单联检测)的荧光标记。

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