鬼笔环肽是鬼笔**家族的主要代表，是一种双环七肽，是从有毒的死亡帽蘑菇伞形毒蕈中分离出来的。它对F-肌动蛋白亚基之间的凹槽具有很高的亲和力。一旦与F-肌动蛋白结合，鬼笔环肽就会使单体和长丝的平衡向长丝位置移动，并抑制ATP水解。相互作用通过防止亚基解离来稳定肌动蛋白丝，并通过降低临界浓度促进肌动蛋白聚合。结果，这些特性使得鬼笔环肽衍生物成为可视化F-肌动蛋白和细胞骨架网络的有用染色剂。本周百萤主要想带大家了解一下关于鬼笔环肽、肌动蛋白以及染色过程中经常遇到的问题。

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1.我可以用戊二醛固定细胞，然后用荧光鬼笔环肽染色吗？ 可以使用戊二醛固定细胞。请根据实验条件选择固定方法。用甲醛、多聚甲醛或戊二醛固定细胞后，用鬼笔环肽缀合物（例如鬼笔环肽-iFluor 488）染色效果较佳。 图示:用鬼笔环肽-iFluor 缀合物标记的肌动蛋白丝。F-肌动蛋白，细胞核和溶酶体分别用（A）Phalloidin iFluor 488（#23115），Nuclear blue DCS1（#17548）和LysoBrite Red（#22645）染色，（B） Phalloidin-iFluor 700（#23129）和Nuclear Blue DCS1（C）Phalloidin-iFluor 350（#23110）和Nuclear Orange DCS1（#17551）。

2.在用鬼笔环肽染料缀合物对肌动蛋白染色之前，应如何固定样品？ 避免使用含甲醇的固定剂，因为它会在固定过程中会破坏肌动蛋白。优选的固定剂是不含甲醇的甲醛。

3.在用鬼笔环肽-iFluor 缀合物对F-肌动蛋白染色之前，我需要对石蜡包埋的组织切片进行脱石蜡处理吗？您可以提供脱石蜡方案吗？ 是的，使用任何荧光鬼笔环肽缀合物对F-肌动蛋白染色，都必须将石蜡包埋的组织切片去石蜡（去除石蜡）。 去除组织切片的石蜡：  将切片加热到57°C持续5分钟。 将切片浸入2次二甲苯中，每次5分钟。 将切片分别浸入100％，95％和70％的乙醇中，每次5分钟。 用1X PBS洗涤2次，每次5分钟。 进行F-肌动蛋白标记。

4.甲醛和多聚甲醛在细胞固定方面有什么区别？ 多聚甲醛（PFA） 是甲醛的聚合物。多聚甲醛本身不是固定剂，需要溶解成甲醛。可以通过加热或在碱性条件下溶解得到甲醛。 福尔马林 是饱和（37％）甲醛溶液的名称。但是请注意，某些商业甲醛溶液中含有甲醇以防止聚合（转化为多聚甲醛）。由于100％福尔马林含有高达15％的甲醇作为稳定剂，因此对细胞固定有很大影响。 甲醇是一种渗透剂。它可以干扰膜结合蛋白的染色，并且可以极大地影响细胞骨架蛋白的染色。例如，当染色细胞F-肌动蛋白时，必须使用不含甲醇的甲醛固定剂。这是因为甲醇可以在固定过程中破坏F-肌动蛋白并阻止鬼笔环肽缀合物的结合。

5.鬼笔环肽对细胞渗透吗？ 鬼笔环肽不是细胞可渗透的，因此不能在活细胞上使用。荧光标记的鬼笔环肽，例如Phalloidin-iFluor 488缀合物，只能在甲醛固定和透化的组织切片、细胞培养和无细胞实验中用于对F-肌动蛋白染色。更多详情

6.鬼笔环肽-iFluor缀合物推荐 货号 产品名称 规格 价格 23115 鬼笔环肽-iFluor 488标记 300Tests 1740 23116 鬼笔环肽-iFluor 514标记 300Tests 1740 23117 鬼笔环肽-iFluor 532标记 300Tests 1740 23119 鬼笔环肽-iFluor 555标记 300Tests 1740 23122 鬼笔环肽-iFluor 594标记 300Tests 1740 23125 鬼笔环肽-iFluor 633标记 300Tests 1740 23127 鬼笔环肽-iFluor 647标记 300Tests 1740 23128 鬼笔环肽-iFluor 680标记 300Tests 3540 23129 鬼笔环肽-iFluor 700标记 300Tests 3540 23130 鬼笔环肽-iFluor 750标记 300Tests 3540 23131 鬼笔环肽-iFluor 790标记 300Tests 3540 23150 鬼笔环肽-AF350标记（升级版：鬼笔环肽-iFluor 350标记) 300Tests 3540 23153 鬼笔环肽-AF488标记（升级版：鬼笔环肽-iFluor 488标记） 300Tests 3540 23158 鬼笔环肽-AF594标记（升级版：鬼笔环肽-iFluor 594标记） 300Tests 3540 图示：A）用鬼笔环肽-iFluor 488染色（#23115）染色的HeLa细胞的荧光图像，并使用配备FITC滤光片的荧光显微镜观察。将细胞固定在4％甲醛中，并与线粒体染料MitoLite Red FX600（#22677）和Nuclear Blue DCS1（#17548）染色；B）用鬼笔环肽-iFluor 514（#23116）染色的HeLa细胞的荧光图像，并使用配备有TRITC滤光片组的荧光显微镜观察。固定的细胞用Nuclear Blue DCS1（#17548）染色；C）用鬼笔环肽-iFluor 532（#23117）染色的HeLa细胞的荧光图像，并使用配有TRITC滤光片组的荧光显微镜观察。固定的细胞用Nuclear Green DCS1（#17550）染色；D）用鬼笔环肽-iFluor 647（#23127）染色的HeLa细胞的荧光图像，并使用配备Cy5滤光片组的荧光显微镜观察。首先用线粒体染料MitoLite Green（#22675）对活细胞进行染色。在4％甲醛中固定后，细胞用鬼笔环肽-iFluor 647标记，并用Nuclear Blue DCS1（蓝色，#17548）染色。