样品分析方案
概述
1.将样本置于微孔板孔中
2.吸弃孔内液体
3.每孔加入100 μL鬼笔环肽-XFD 555标记液
4.室温避光孵育20–90分钟
5.清洗细胞去除未结合染料
6.使用Cy3滤光片进行荧光显微镜观察
注意:将小瓶加热至室温并在打开前短暂离心。
储存条件
-20℃避光保存可稳定至少6个月,避免反复冻融
鬼笔环肽具毒性(半数致死量LD50=2 mg/kg),虽单管含量极低(仅对蚊虫可能致命),仍需谨慎操作
工作溶液配置
鬼笔环肽-XFD 555标记工作溶液
取1 µL鬼笔环肽-XFD 555标记原液加入1 mL含1% BSA的PBS缓冲液中混匀。
注意1. 鬼笔环肽标记原液需分装后-20℃避光保存
2.不同细胞类型染色效果可能存在差异,建议根据实际情况调整工作液浓度
样本实验操作流程
细胞染色
1.使用3.0-4.0%甲醛PBS溶液室温固定细胞10-30分钟
注意:避免使用含甲醇固定剂,甲醇会破坏肌动蛋白结构。推荐使用无甲醇甲醛固定剂
2.PBS缓冲液洗涤固定后细胞2-3次
可选:为提高通透性,可加入0.1% Triton X-100 PBS溶液处理3-5分钟,之后用PBS洗涤2-3次
3.向96孔板每孔加入100 μL鬼笔环肽-XFD 555工作液,室温避光染色20-90分钟
4.用PBS轻柔洗涤2-3次去除多余标记物,封片后使用Cy3滤光片组进行荧光显微镜观察