西安百萤生物科技有限公司 主营:百萤生物围绕荧光发光、荧光标记、荧光探针等技术进行产品研发,公司产品广泛用于核酸蛋白定量、细胞凋亡研究、细胞信号通路研究、细胞及线粒体膜电位检测、细胞器染色、活体示踪、抗体标记等科研领域。
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产品详情

Fluo-8最亮的钙离子荧光探针

  • 如果您对该产品感兴趣的话,可以
  • 产品名称:Fluo-8最亮的钙离子荧光探针
  • 产品型号:21080
  • 产品展商:AAT Bioquest
  • 产品文档:无相关文档
简单介绍

Fluo-8*亮的钙离子荧光探针,在许多生物学研究中钙离子的测定非常重要。在与钙离子结合的条件下,荧光探针显现出光谱响应,这使研究者可以通过利用荧光显微镜、流式细胞仪、荧光分光镜和荧光分光仪等来研究细胞内部游离的Ca2+浓度的变化。在众多的被可见光激发的钙离子指示剂中,Fluo-8*亮的钙离子荧光探针。

产品描述

钙离子荧光探针Fluo-8, AM

货号                   21080                      存储条件                    F/L                            
规格 1 mg 价格 2208
Ex (nm) 494 Em (nm) 517
分子量 1046.93 溶剂 DMSO

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简要概述

        钙离子荧光探针Fluo-8®, AM是美国AAT Bioquest生产的用于钙通量测定的试剂,钙通量测定是用于筛选G蛋白偶联受体(GPCR)的**发现中的优选方法。 我们的Quest Fluo-8®和Rhod-4 系列钙检测试剂是*亮的绿色和红色钙指示剂。 我们的其他钙指标如Fluo-3,Fura-2,Indo-1,Rhod-5N和Rhod-2 AM也具有与市场上相比*高的质量,百萤生物是AAT Bioquest 的中国代理商,为您提供*上等的钙离子荧光探针。

点击查看实验方案
产品光谱图


产品说明书

操作步骤

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞:

        AM酯是非极性酯,其易于穿过活细胞膜,并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。 但是,使用AM酯时必须小心,因为它们易于水解,特别是在溶液中。 它们应在使用前用高质量的无水二甲基亚砜(DMSO)重新配制。 DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。 在这些条件下,AM酯应稳定数月。

        以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指南,实际情况应根据您的具体需求进行修改。

a)在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b)在实验当天,将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.02%Pluronic®F-127在您选择的缓冲液(如Hanks和Hepes缓冲液)中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系,我们建议钙指示剂的*终浓度为4-5 uM。 细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。 为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影,建议使用可产生足够信号强度的*小探针浓度。

注意:非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加钙指示剂AM酯的水溶性。

c)如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白,可以在细胞培养基中加入丙磺舒(1-2.5 mM)或磺吡酮(0.1-0.25 mM),以减少脱酯化指标的泄漏。 在室温或37°C下用钙指示剂酯孵育细胞20分钟至1小时。

d)在HHBS或您选择的缓冲液(含有阴离子转运蛋白抑制剂,如2.5mM丙磺舒,如果适用)中洗涤细胞1-2次以除去过量的探针。

e)在所需的Ex / Em波长下进行实验(见说明书中的表1)。


2.测量细胞内钙响应:

        为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd,使用以下等式:[Ca]free = Kd[F - Fmin]/Fmax - F]

        其中F是实验钙水平下指示剂的荧光,Fmin是不存在钙时的荧光,Fmax是钙饱和探针的荧光。 解离常数(Kd)是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比,荧光指示剂的Ca2+结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者,细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。 说明书中的表1列出了一些钙试剂的Kd值供您参考。


图示

将U2OS细胞以40,000个细胞/100μL/孔接种过夜,置于96孔黑色壁/透明底板中。 除去生长培养基,将细胞分别与100μLFluo-3 AM,Fluo-4 AM和Fluo-8 AM在HHBS中以4μM浓度在37℃,5%CO 2中温育。 孵化器1小时。 用200μLHHBS洗涤细胞两次,然后使用FITC通道用荧光显微镜(Olympus IX71)成像。


Fluo-8活细胞方案(点击查看)




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