西安百萤生物科技有限公司 主营:百萤生物围绕荧光发光、荧光标记、荧光探针等技术进行产品研发,公司产品广泛用于核酸蛋白定量、细胞凋亡研究、细胞信号通路研究、细胞及线粒体膜电位检测、细胞器染色、活体示踪、抗体标记等科研领域。
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产品详情

细胞增殖与活性检测CCK-8试剂盒

  • 如果您对该产品感兴趣的话,可以
  • 产品名称:细胞增殖与活性检测CCK-8试剂盒
  • 产品型号:35001
  • 产品展商:Biolite
  • 产品文档:无相关文档
简单介绍

细胞增殖与活性检测CCK-8试剂盒是一种基于SST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。细胞增殖与活性检测CCK-8试剂盒很受欢迎。

产品描述


Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 细胞增殖与活性检测试剂盒

货号                  35001                  存储条件                             建议在低于-15℃温度下冷冻保存
规格 5ml 价格 590
Ex (nm)
Em (nm)
分子量 600.47 溶剂 Water
产品详细介绍

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简要概述

        Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 细胞增殖与活性检测试剂盒是百萤生物生产的一种基于 SST-8 的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。其主要成分为水溶性四唑盐 SST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐),SST-8 是一种类似于 MTT 的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的水溶性的甲臜(formazan,参考图1)。SST-8 被细胞内脱氢酶生物还原后生成的甲臜能够直接溶解在培养基中。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供*上等的荧光探针。 

  • CCK-8 细胞增殖与活性检测的专家
  • CCK-8 常见问题详解


产品特点

        本试剂盒提供了一种灵敏度高,操作简便,使用安全的细胞增殖与活性检测方法。与传统的 MTT 实验相比具有明显的优势:


1.MTT实验生成的甲臜不是水溶性的,需要使用 DMSO 等有机溶剂溶解;而本方法产生的甲臜是水溶性的,不仅省去了溶解步骤,更因此而减少了该操作步骤带来的误差。

2.与 MTT 方法相比,本方法线性范围更宽,灵敏度更高。

3.本方法对细胞无毒性,可以多次测定,选取*佳测定时间。

4.本方法所用试剂在培养基中比 MTT 更加稳定,实验结果重复性好。

5.MTT 具有毒性,同时其生成的甲臜需要有机溶剂溶解,会对操作人员身体造成危害。本试剂无毒,使用中无需有机溶剂,操作更加安全。

6.本试剂盒在 4°C 避光可长期保存,使用无需配制,即开即用。


        本试剂盒可以用于生物活性因子的活性检测,抗肿瘤**的筛选,细胞增殖的测定,细胞毒性检测以及药敏等与细胞活性和增殖相关的实验。本试剂盒使用方便,试剂盒包含一管已经配制好的含有 SST-8 的 CCK-8 溶液,即开即用,无需其他准备步骤。检测过程也无需采用额外的步骤去溶解甲臜,可直接使用 96 孔板或者 384 孔板在酶标仪上检测,适合大规模,高通量的样品检测。


产品说明书

实验方案

1.在96 孔板中配置100μL的细胞悬液(通常细胞增殖实验每孔加入100μL2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100μL5000个细胞。具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等因素决定)。按照实验需要,进行培养(在37°C,5%CO2的条件下)预培养24 小时。

2.向培养板加入1-10μL 不同浓度的待测**刺激。

3.将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6、12、24 或48 小时)。

4.每孔加入10μLCCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD 值的读数)。如果起始的培养体积为200μL,则需加入20μLCCK-8溶液,其它情况以此类推。可以用加了相应量细胞培养液和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。如果担心所使用的**会干扰检测,需设置加了相应量细胞培养液、**和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。

5.在细胞培养箱内继续孵育1-4小时,对于大多数情况孵育1小时就可以了。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定,初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测,然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。

6.用酶标仪测定在450nm处的吸光度,如无450nm滤光片,可以使用420-480nm的滤光片。可以使用大于600nm的波长,例如650nm,作为参考波长进行双波长测定。

7.如果暂时不测定OD 值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入10 μL 0.1M 的HCL 溶液或者1% w/v SDS 溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。

注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK 之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉**影响。当然**影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入**后的空白吸收即可。


注意事项:

1.由于使用96孔板进行检测,如果细胞培养时间较长,一定要注意蒸发的问题。一方面,由于96孔板周围一圈*容易蒸发,可以采取弃用周围一圈的办法,改加PBS,水或培养液;另一方面,可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方,以缓解蒸发。

2.CCK-8检测细胞活性的原理是通过检测活细胞脱氢酶催化的反应。任何待测体系中存在还原剂,例如一些抗氧化剂会干扰检测,需设法去除。

3.建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。

4.建议采用多通道移液器,可以减少平行孔间的差异。加入CCK 试剂时,建议斜贴着培养板壁加,不要插到培养基液面下加样,容易产生气泡,会干扰OD 值读数。

5.当使用标准96 孔板时,贴壁细胞的*小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μL培养基),且培养时间长一些。如果要使用24 孔板或6 孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。

6.加入CCK -8溶液时,如果细胞培养时间较长,培养基颜色已变化或pH值变化。建议换用新鲜的培养基。

7.如果没有450nm 的滤光片,可以使用吸光度在430-490 nm 之间的滤光片,但是450nm 滤光片的检测灵敏度*高。

8.酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。

9.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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