Rhod-2AM 是一种常应用于细胞钙离子检测的荧光探针，尤其在 线粒体钙信号（Mitochondrial Ca²⁺ Signaling） 研究中具有独特优势，在细胞生物学研究中发挥着重要作用。
1.为什么选择 Rhod-2AM 研究线粒体钙？
高灵敏度：对低浓度 Ca²⁺（~nM-μM 范围）响应灵敏。
线粒体靶向性：优于其他钙探针（如 Fluo-4、Fura-2），减少胞质信号干扰。
双模式检测：适用于荧光显微镜（实时成像）和流式细胞术（群体分析）。
多通道兼容性：可与绿色荧光探针（如Fluo-4 AM）或蓝色核染料（如Hoechst）联用，实现多参数分析。
2.应用场景示例
线粒体钙与细胞凋亡：检测凋亡刺激（如 STS）下线粒体钙超载与 mPTP 开放的关系。
能量代谢研究：结合 Seahorse 分析仪，关联钙信号与 OXPHOS 效率。
神经元活动：研究突触后线粒体钙瞬变（如与电生理联用）。
3.使用技巧与注意事项
3.1优化染色条件
A.细胞密度：建议1X105 cells/mL，避免过度拥挤影响染料加载。
B.孵育时间：30-45分钟（37℃），过长可能导致染料外排或细胞毒性。
3.2干扰因素控制
A. 避免使用含血清培养基（酯酶活性干扰），加载后彻底清洗减少背景信号。
B. 线粒体膜电位崩溃剂（如CCCP）可验证染料定位特异性。
3.3数据分析：
使用比率法（如与TMRM联用）校正膜电位变化对荧光强度的影响。
图示：
图2.利用激光扫描共聚焦显微镜分析了细胞内游离 Ca2+ 的分布情况。
细胞内游离 Ca2+ 通过红色荧光探针Rhod-2 AM进行检测。细胞核用 DAPI（蓝色）染色。携带 eGFP 报告基因的 pEZ-LV203 载体产生了绿色荧光蛋白。